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Jul 26, 2023

La decocción de Xuefu Zhuyu, una medicina tradicional china, proporciona neuroprotección en un modelo de rata de lesión cerebral traumática a través de un anti

Scientific Reports volumen 6, Número de artículo: 20040 (2016) Cita este artículo 7472 Accesos 81 Citas 2 Detalles de Altmetric Metrics La neuroinflamación es fundamental para la patología del cerebro traumático

Scientific Reports volumen 6, número de artículo: 20040 (2016) Citar este artículo

7472 Accesos

81 citas

2 altmétrico

Detalles de métricas

La neuroinflamación es fundamental para la patología de la lesión cerebral traumática (TBI). La decocción de Xuefu Zhuyu (XFZY) es una medicina tradicional china eficaz para tratar la lesión cerebral traumática. Para dilucidar su potencial mecanismo molecular, este estudio tuvo como objetivo demostrar que XFZY funciona como un agente antiinflamatorio al inhibir la vía PI3K-AKT-mTOR. Se expuso a ratas Sprague-Dawley a un impacto cortical controlado para producir una respuesta neuroinflamatoria. Los grupos de tratamiento recibieron XFZY (9 g/kg y 18 g/kg), el grupo Vehículo y el grupo Sham recibieron volúmenes iguales de solución salina. Para evaluar los déficits neurológicos se utilizaron la puntuación de gravedad neurológica modificada (mNSS) y la prueba del laberinto acuático de Morris. Los niveles de ácido araquidónico (AA) en el tejido cerebral se midieron mediante cromatografía de gases en tándem-espectrometría de masas. Mediante ELISA se detectaron los niveles de TNF-α e IL-1β en tejido cerebral ipsilateral lesionado. La expresión de AKT y mTOR se midió mediante análisis de transferencia Western. Los resultados indicaron que XFZY mejoró significativamente la adquisición de memoria espacial. XFZY (especialmente en una dosis de 9 g/kg) redujo notablemente el mNSS y los niveles de AA, TNF-α e IL-1β. Se observó una regulación negativa significativa de las proteínas AKT/mTOR/p70S6K en los tejidos cerebrales después de la administración de XFZY (especialmente en una dosis de 9 g/kg). XFZY puede ser una estrategia terapéutica prometedora para reducir la inflamación en la TBI.

El traumatismo craneoencefálico (TCE), una lesión intracraneal causada por una fuerza externa que excede la capacidad protectora del cerebro, es la principal causa de mortalidad y discapacidad en personas menores de 45 años1. Anualmente, 5,3 millones de personas sufren TBI en los Estados Unidos2. De ellas, 1,4 millones de personas requieren tratamiento de emergencia y más de 235.000 requieren hospitalización3. En China, la proporción de personas con TCE grave causada principalmente por accidentes de tráfico o caídas de alto nivel es mucho mayor que en otros países4. Se estima que alrededor de 10 millones de personas se ven afectadas anualmente por TCE en todo el mundo5. Aunque varias terapias para el TBI, como la progesterona6, la minociclina, la melatonina, las estatinas y las células madre mesenquimales3,7, han mostrado resultados prometedores en la investigación básica y en los primeros ensayos clínicos, hasta la fecha, ninguna ha tenido éxito en los ensayos clínicos de fase III8.

La compleja patogénesis del TCE es inducida inicialmente por daño mecánico, al que le sigue una serie de cascadas de lesiones secundarias9. Durante las etapas aguda y crónica del TCE, la neuroinflamación ha sido implicada como la clave para la patología y el tratamiento de la enfermedad3,10,11. La neuroinflamación es una reacción inmune robusta y estéril mediada por células inflamatorias residentes en el sistema nervioso central (SNC) y reclutadas periféricamente12. Después de una lesión cerebral traumática, la explosión de especies reactivas de oxígeno (ROS) y el aumento de los niveles de glutamato contribuyen a una reacción inflamatoria13,14, que exacerba el edema al aumentar la permeabilidad de la barrera hematoencefálica15. Además, la inflamación previene la regeneración nerviosa al influir en la formación de cicatrices gliales11,16. Además, el proceso patológico perjudica la memoria cognitiva al alterar la síntesis macromolecular necesaria para la plasticidad sináptica17. La inflamación que es inducida por las contusiones cerebrales vía mecanismos fisiopatológicos causa el 60% del daño secundario18. Por lo tanto, los tratamientos dirigidos a la neuroinflamación han atraído mucha atención como posibles tratamientos para la lesión cerebral traumática.

El ácido araquidónico (AA (20:4ω6)) es un precursor de las prostaglandinas (PG) y los leucotrienos (LT), los cuales inducen la infiltración celular inflamatoria19. Los primeros en responder durante la inflamación son los leucocitos polimorfonucleares (es decir, los neutrófilos), seguidos de los monocitos, leucocitos multipotentes derivados de la médula ósea que se diferencian en macrófagos20. Estas células inflamatorias que se reclutan en la zona de la lesión secretan varios factores inflamatorios10,12. El TNF-α es la citocina central que inicia y regula la respuesta inflamatoria21. La IL-1β juega un papel importante en el desarrollo y progresión de la cascada inflamatoria celular22. Además, la microglía/macrófagos que están presentes en el tejido cerebral después de un traumatismo se activan y persisten como el fenotipo M1, que produce principalmente citocinas proinflamatorias (p. ej., TNF-α e IL-1β) durante la fase crónica10. Posteriormente, es razonable considerar AA, IL-1β y TNF-α como objetivos para evaluar el grado de inflamación.

Cada vez hay más pruebas que indican que la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR tiene un papel fundamental en el ajuste de la respuesta inflamatoria23,24,25. PI3K-AKT-mTOR es una vía regular fundamental de crecimiento y metabolismo celular que integra diversas señales ambientales8,26. Al inicio del trauma cerebral, la vía de señalización AKT-mTOR se activa en el parénquima cerebral debido al estado cerebral irritable del TBI27,28,29. AKT se activa principalmente mediante la modulación de PI3K aguas arriba y su grado de fosforilación refleja indirectamente los niveles de PI3K activo. La PI3K fosforilada recluta AKT y la proteína quinasa 1 dependiente de 3-fosfoinosítido (PDK1) en la membrana celular y activa AKT. La fosforilación de AKT estimula directamente mTOR, que es una proteína quinasa de serina-treonina ubicua. Posteriormente, la vía de señalización mTOR se activa en el parénquima cerebral23,27,29, donde modula la síntesis de citoquinas pro o antiinflamatorias en células inmunes24 como neutrófilos30, macrófagos25 y microglía23. La vía activada anterior da como resultado una mayor producción de citocinas proinflamatorias (p. ej., TNF-α e IL-1β) para reclutar neutrófilos y monocitos25,30 y activar la microglía23. La inhibición de la vía mTOR está en una posición única para reducir la producción de citocinas proinflamatorias23,25,30,31 y mejorar los déficits neuroconductuales27,29,31.

Como resultado de la práctica clínica empírica durante muchos siglos y del hecho de que los compuestos derivados de la medicina tradicional china (MTC) tienen numerosos objetivos en lugar de utilizar el paradigma de descubrimiento de fármacos de un compuesto/un objetivo32, la investigación acumulada sugiere que la MTC es una novela potencialmente poderosa. droga. La decocción de Xuefu Zhuyu (XFZY) es una antigua fórmula de la medicina tradicional china para el tratamiento de enfermedades vasculares cardíaco-cerebrales, incluida la angina de pecho inestable33, la cardiopatía isquémica34, la lesión cerebral hipóxica-isquémica35 y los trastornos mentales traumáticos poscraneales36. Fue descrito por primera vez en el libro "Yilin Gaicuo" de Qingren Wang a finales de la dinastía Qing, hace aproximadamente 185 años. En aquel momento, constaba de 11 hierbas crudas: Prunus persica (L.) Batsch (Taoren), Angelicae sinensis (Oliv.) Diels (Danggui), Ligusticumi chuanxiong Hort. (Chuanxiong), Carthamus tinctorius L. (Honghua), Paeonia lactiflora Pall. (Chishao), Rehmannia glutinosa Libosch. (Dihuang), Citrus aurantium L. (Zhiqiao), Bupleurum chinense DC. (Chaihu), Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC. (Jiegeng), Achyranthes bidentata Bl. (Niuxi) y Glycyrrhiza uralensis Fisch. (Gancao). Los ensayos controlados aleatorios de XFZY han demostrado efectos válidos en pacientes con TBI36,37,38. Se ha demostrado que los compuestos derivados de XFZY, incluido el amarillo de hidroxisaflor A (HSYA) y la amígdala, poseen la capacidad de controlar la respuesta inflamatoria39,40,41. La evidencia anterior también indica que el mecanismo potencial de neuroprotección contra TBI por XFZY podría implicar la reducción de la cascada inflamatoria. Sin embargo, aún se desconocen los detalles sobre la actividad antiinflamatoria farmacológica de XFZY en el TBI.

El objetivo del presente estudio fue investigar si XFZY ejerce efectos antiinflamatorios contra la TBI al inhibir la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR y proporcionar evidencia de un papel potencial de XFZY como fármaco neuroprotector para el tratamiento de la TBI (detalles experimentales se muestran en un diagrama de flujo en la Fig. 1).

Diagrama de flujo del experimento.

El experimento se realizó en seis grupos: Vehículo, Sham, 9 g/kg XFZY, 18 g/kg XFZY, Sham 9 g/kg XFZY y Sham 18 g/kg XFZY. El régimen de dosificación para cada grupo se aplicó de forma continua una vez al día después de la TBI. El control de calidad de XFZY se realizó mediante LCMS-IT-TOF. El día 1, 3, 7 y 14 después de la TBI, se extrajeron aleatoriamente 8 ratas de cada grupo, excepto los grupos simulados de 9 g/kg XFZY y simulados de 18 g/kg XFZY. Luego, los roedores fueron sacrificados para la recolección de muestras después de las pruebas de función neurológica. Se utilizaron muestras de cerebro para ensayos bioquímicos y determinación del ácido araquidónico mediante GC-MS. Las 12 ratas restantes de cada grupo mencionado anteriormente fueron examinadas para evaluar las puntuaciones de la función neurológica los días 1, 3, 7, 14 y 21 después de la lesión cerebral traumática. Estas 12 ratas en cada grupo y 8 ratas en cada uno de los grupos XFZY simulados (9 g/kg o 18 g/kg) se sometieron a pruebas de MWM del día 17 al 21.

Para garantizar la calidad del XFZY (Fig. 2A) que se utilizó en nuestro estudio, se utilizaron como compuestos centrales HSYA y Amygdalin procedentes del fármaco monarca prescrito por XFZY. Se utilizaron como estándares de control de calidad para XFZY. LCMS-IT-TOF se realizó con ácido fórmico al 0,1% en agua y acetonitrilo para la separación. Se utilizó espectrometría de masas en tándem acoplada para los análisis cuantitativos y cualitativos. Como se muestra en la Fig. 2, MS1 y MS2 de Amygdalin fueron m/z 458,16 (Fig. 2C) y 296,11 (Fig. 2D), respectivamente. MS1 y MS2 de HSYA fueron m/z 613,17 (Fig. 2E) y 451,12 (Fig. 2F), respectivamente. Los tiempos de retención de Amygdalin y HSYA en los cromatogramas LCMS-IT-TOF de XFZY en el modo ESI positivo fueron 2,50 ± 0,02 min y 3,48 ± 0,04 min, respectivamente (Fig. 2B). Las variaciones generales intra e interdía en HSYA y Amygdalin fueron inferiores al 5%. El método fue verificable y proporcionó buena precisión. Se realizó una prueba de recuperación como prueba de precisión y la recuperación de los dos analitos fue >90%. Los resultados mostraron que los contenidos de dos compuestos probados en XFZY fueron los siguientes: HSYA, 0,942 ± 0,021 mg/g; Amigdalina, 0,107 ± 0,005 mg/g.

Cromatografía líquida acoplada a trampa de iones de alta resolución y análisis de espectrometría de masas de tiempo de vuelo (LCMS-IT-TOF) para la determinación de HSYA y amigdalina, que se originó a partir de la droga monarca XFZY.

(A) Medicinas herbarias chinas preparadas de XFZY en pequeñas cantidades que están listas para decocción. (B) Cromatogramas LCMS-IT-TOF TIC de XFZY en modo ESI positivo y perfiles cromatográficos de Amygdalin y HSYA. (C,D) MS1 y MS2 de Amygdalin fueron m/z 458,16 y 296,11, respectivamente. (E, F) MS1 y MS2 de HSYA fueron m/z 613,17 y 451,12, respectivamente.

Para investigar si el tratamiento con XFZY podría mejorar la recuperación funcional neuronal después de una lesión cerebral traumática, examinamos los cambios en mNSS y calculamos la variación en ΔmNSS a lo largo del tiempo. Después de la CCI, se evaluaron los déficits neurológicos en puntos de tiempo predeterminados y el tratamiento con XFZY dio como resultado una recuperación neurológica mejorada, como lo demuestra una disminución en las puntuaciones de mNSS (Fig. 3A) y un aumento en las puntuaciones de ΔmNSS (Fig. 3B), en comparación con el vehículo. grupo. Las ratas que fueron tratadas con 9 g/kg de XFZY continuaron mostrando mejoras significativas desde el día 3 al 21 en comparación con el grupo del vehículo, mientras que en los días 3 y 21 las ratas que fueron tratadas con 18 g/kg de XFZY mostraron una mejora significativa. mejora en la recuperación neurológica en comparación con el grupo de vehículo, como lo indican las puntuaciones mNSS y ΔmNSS. Además, los dos grupos de XFZY difirieron significativamente entre sí en los siguientes intervalos: 1 a 7, 1 a 14 y 1 a 21 días (Fig. 3B). Curiosamente, estos resultados indicaron que se lograron mayores mejoras en la función neurológica con 9 g/kg de XFZY que con el tratamiento con 18 g/kg de XFZY.

Puntuación de gravedad neurológica modificada (mNSS) después de una lesión cerebral traumática o una lesión simulada o una lesión cerebral traumática con XFZY.

(A) La función neurológica fue evaluada mediante mNSS después de 1 hora para evaluar la discapacidad inicial y los días 3, 7, 14 y 21 después de la LCT. El tratamiento con 9 g/kg de XFZY redujo significativamente la mNSS los días 3, 7, 14 y 21 en comparación con el grupo Vehículo. El tratamiento con 18 g/kg de XFZY resultó en una disminución significativa en los días 3 y 21 (n = 8/grupo, los datos se analizan mediante ANOVA de dos vías y se presentan como la media ± SEM. p < 0,05 frente al grupo Vehículo) . (B) Los cambios en mNSS (ΔmNSS) se evaluaron en varios intervalos de tiempo entre el primer día y múltiples puntos de tiempo predeterminados a partir de entonces, considerando que el rendimiento de mNSS no fue significativo el primer día (valores medios de mNSS: 9 g/kg grupo XFZY = 12,8 ± 0,4, 18 g/kg grupo XFZY = 13,2 ± 0,4, grupo Vehículo = 13,5 ± 0,5, todos p > 0,05 comparados entre sí). El tratamiento con 9 g/kg de XFZY mejoró significativamente el ΔmNSS en intervalos de tiempo de 1 a 3, 1 a 7, 1 a 14 y 1 a 21 días. El tratamiento con 18 g/kg de XFZY aumentó significativamente el ΔmNSS durante el intervalo de 1 a 3 y de 1 a 21 días. El ΔmNSS en el grupo de 9 g/kg de XFZY aumentó significativamente durante los intervalos de tiempo de 1 a 7, 1 a 14 y 1 a 21 días en comparación con el grupo de 18 g/kg de XFZY (n = 12/grupo, los datos se analizaron con RM ANOVA y se presentan como la media ± SEM. *p < 0,05, #p < 0,01 frente al grupo Vehículo. ∆p < 0,05, □p < 0,01 frente al grupo XFZY de 9 g/kg).

La prueba del laberinto acuático de Morris (MWM) se realizó utilizando ratas con lesiones simuladas y CCI que fueron tratadas con vehículo, 9 g/kg de XFZY o 18 g/kg de XFZY. Observamos un efecto significativo de CCI en senderos de plataformas ocultas (p <0,01 para CCI versus lesión simulada) utilizando un ANOVA de RM de modelo mixto para determinar el estado de la lesión (simulada versus CCI) y tres grupos de tratamiento (9 g/kg XFZY, 18 g/kg XFZY, o vehículo) sin interacción. En ratas con lesiones simuladas, el tratamiento con 9 g/kg de XFZY o 18 g/kg de XFZY no produjo diferencias significativas en el rendimiento en la prueba de plataforma oculta o visible en comparación con el tratamiento con vehículo (Fig. 4A) o las pruebas con sonda (Fig. 4B). . Este hallazgo sugiere que XFZY no tuvo un efecto significativo sobre la función cognitiva en ausencia de deterioro por TBI. Después de la CCI, se observaron diferencias significativas entre los grupos de tratamiento (P <0,01) y las ratas tratadas con 9 g/kg de XFZY exhibieron un rendimiento significativamente mejorado en la plataforma oculta (P <0,05 versus vehículo) (Fig. 4C) y en las pruebas de sonda (P < 0,05 frente al vehículo) (Fig. 4D). Sin embargo, se observó un cambio significativo entre el grupo XFZY de 18 g/kg y el de vehículo solo en la prueba con sonda (Fig. 4D), sin diferencias significativas en la prueba con plataforma oculta (P > 0,05 versus vehículo) (Fig. 4C). Este hallazgo indicó que el tratamiento con 9 g/kg de XFZY fue más beneficioso para el tratamiento del deterioro cognitivo inducido por TBI que 18 g/kg de XFZY.

Efecto de XFZY sobre los resultados cognitivos después de una lesión simulada o un impacto cortical controlado (CCI).

(A,B) Se administraron ratas con lesiones simuladas (n = 8/grupo) con 9 g/kg de XFZY, 18 g/kg de XFZY o una cantidad equivalente de solución salina cada día. Luego se realizó la prueba del laberinto acuático de Morris (MWM) del día 17 al 21 después de la lesión simulada. El rendimiento en el MWM no reveló diferencias entre la plataforma oculta y visible (p > 0,05 para el grupo, ANOVA de medidas repetidas (RM ANOVA)) o en las pruebas de sonda (p > 0,05, B), a pesar de aprender la tarea (p < 0,01 por tiempo, pruebas de plataforma oculta y visible). (C, D) En los grupos CCI (n = 12/grupo), se observaron efectos grupales significativos en las pruebas de plataforma oculta para evaluar el impacto del tratamiento XFZY (p <0,01 para el grupo) en el aprendizaje de los paradigmas de la plataforma oculta (p < 0,01 para el tiempo en cada grupo). Las ratas que fueron tratadas con 9 g/kg de XFZY se desempeñaron significativamente mejor que los ratones tratados con vehículo en las pruebas de plataforma oculta (p <0,05) y sonda (p <0,05). Aunque no hubo diferencias significativas en la prueba de plataforma oculta, el grupo de XFZY de 18 g/kg mostró un rendimiento significativamente mejorado en las pruebas de sonda en comparación con el grupo de Vehículo (p < 0,05). No se observaron diferencias en el rendimiento de la plataforma visible entre los grupos de CCI (p > 0,05 para el grupo). *p < 0,05 frente al grupo de vehículos.

A continuación, evaluamos los niveles de AA en tejidos cerebrales lesionados, tanto cuantitativa como cualitativamente, mediante cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS). La m/z de AA fue 67, 73, 75, 79, 91 y 117 (Fig. 5A). El tiempo de retención en TIC de GC-MS de AA después de la derivatización de MeOx-TMS fue de 24,90 ± 0,02 min (Fig. 5B). El contenido de AA en las muestras de cerebro se determinó cuantitativamente basándose en la relación entre el área del pico y el AA de referencia auténtico. A pesar de la disminución gradual de los niveles de AA en el tejido de TBI, los niveles de AA en el tejido cerebral ipsilateral aumentaron significativamente desde el día 1 al 14. El tratamiento con 9 g/kg de XFZY mejoró el aumento de AA después de una TBI durante todo el estudio, mientras que 18 g/kg kg XFZY fue efectivo solo por un corto tiempo (Fig. 5C). Además, al tercer día, se observó una reducción significativa de AA en el tejido cerebral ipsilateral en ratas que recibieron 9 g/kg de XFZY en comparación con 18 g/kg de XFZY (Fig. 5C).

Determinación cuantitativa de ácido araquidónico (AA) en tejidos cerebrales ipsilaterales los días 1, 3, 7, 14 y 21 después de una TBI o una lesión simulada o una TBI administrada con XFZY oral.

(A) GC-MS m/z de AA después de la derivatización de MeOx-TMS es 67, 73, 75, 79, 91 y 117. El diagrama superior muestra el espectro de masas de AA en una muestra de cerebro y el diagrama inferior muestra el espectro de masas. del estándar AA. (B) TIC GC-MS de AA después de la derivatización de MeOx-TMS. (C) Concentración de AA en el tejido cerebral los días 1, 3, 7, 14 y 21 después de la lesión. Los contenidos de AA aumentaron significativamente en el grupo Vehículo en comparación con el grupo simulado desde el día 1 al 14 después de la lesión, mientras que el tratamiento con 9 g/kg de XFZY redujo significativamente el aumento de los niveles de AA en comparación con el grupo Vehículo el día 1. Días 3, 7 y 14. El tratamiento con 18 g/kg de XFZY redujo significativamente los niveles elevados de AA en comparación con el grupo Vehículo en los días 1, 3 y 7. El tercer día, el tratamiento con 9 g/kg de XFZY redujo significativamente los niveles de AA en el tejido cerebral ipsilateral en comparación con el grupo de 18 g/kg de XFZY (n = 8/grupo). Todos los datos se analizaron mediante ANOVA de dos factores y se presentan como media ± SEM. *p < 0,05, #p < 0,01 frente al grupo de vehículos. Δp < 0,05 frente al grupo de 9 g/kg de XFZY.

Para apuntar a los factores proinflamatorios TNF-α e IL-1β, que reflejan el estado inflamatorio del cerebro, examinamos los niveles de TNF-α e IL-1β en el tejido cerebral ipsilateral después de una lesión traumática en el modelo de CCI en roedores. Los niveles sustancialmente aumentados de TNF-α e IL-1β persistieron en el tejido cerebral ipsilateral desde el día 1 al 14 después de la TBI (Fig. 6). El nivel máximo de TNF-α se observó el tercer día después de la TBI (Fig. 6A) y los valores máximos de IL-1β se detectaron el primer día (Fig. 6B). La administración de XFZY (9 g/kg y 18 g/kg) inhibió significativamente el aumento tanto de TNF-α como de IL-1β causado por TBI (Fig. 6), lo que implica que XFZY moduló la producción de citocinas proinflamatorias. Sorprendentemente, la gran mejora de los niveles de TNF-α regulados positivamente (Fig. 6A) y los marcados efectos inhibidores de 9 g/kg de XFZY sobre TNF-α (Fig. 6A) o IL-1β (Fig. 6B) fueron mayores que los de 18 g/kg de XFZY, lo que indicó que 9 g/kg de XFZY regulaban negativamente de manera más efectiva la respuesta proinflamatoria.

Ensayo de niveles de citoquinas proinflamatorias en tejido cerebral.

(A) Los niveles de TNF-α en lisados ​​cerebrales de cada grupo. Los niveles de TNF-α aumentaron significativamente en el grupo Vehículo en comparación con el grupo Sham desde el día 1 al 14 después de la lesión, mientras que el tratamiento con 9 g/kg de XFZY redujo significativamente el aumento de TNF-α en comparación con el grupo Vehículo en los días 1, 3, 7 y 14. El tratamiento con 18 g/kg de XFZY redujo significativamente el aumento de los niveles de TNF-α en comparación con el grupo de Vehículo en los días 1, 3 y 7 (n = 8/grupo). En los días 7 y 14, los niveles de TNF-α en el grupo de 9 g/kg de XFZY fueron significativamente más bajos que los del grupo de 18 g/kg de XFZY. (B) Los niveles de IL-1β en lisados ​​cerebrales en cada grupo. Los contenidos de IL-1β aumentaron significativamente en el grupo Vehículo en comparación con el grupo Sham desde el día 1 al 14 después de la lesión. El tratamiento con 9 g/kg de XFZY redujo significativamente los niveles elevados de IL-1β en comparación con el grupo Vehículo en los días 1, 3, 7 y 14. El tratamiento con 18 g/kg de XFZY redujo significativamente los niveles elevados de IL-1β en comparación con el grupo Vehículo en los días 1, 3, 7 y 14. En los días 3 y 7, el tratamiento con 9 g/kg de XFZY redujo significativamente los niveles de IL-1β en el tejido cerebral ipsilateral en comparación con el tratamiento con 18 g/kg de XFZY (n = 8/grupo). Todos los datos se analizaron mediante ANOVA de dos factores y se presentan como media ± SEM. *p < 0,05, #p < 0,01 frente al grupo de vehículos. ∆p < 0,05 frente al grupo de 9 g/kg XFZY.

Para explorar si el efecto antiinflamatorio de XFZY estaba regulado a través de la vía de señalización PI3K/AKT/mTOR, realizamos un análisis de transferencia Western de la expresión de la proteína AKT/mTOR/p70S6K total o de fósforo en el hemisferio ipsilateral de CCI con lesión simulada. , o ratas tratadas con CCI y XFZY. Observamos una marcada regulación positiva de la fosforilación de AKT en el tejido cerebral ipsilateral el primer y tercer día después de la TBI (Fig. 7B), sin cambios notables en la expresión total de AKT (Fig. 7B). De manera análoga, se observó un aumento de la fosforilación de mTOR desde el día 1 al 14 (Fig. 7D) y estuvo acompañado por una ausencia de variación notable en la expresión proteica de mTOR total (Fig. 7D). La quinasa ribosomal S6 p70 (p70S6K), uno de los principales objetivos posteriores de la señalización mTOR, también se fosforiló significativamente en el hemisferio ipsilateral desde el día 1 al 14 después de la lesión cerebral traumática (Fig. 7F). No hubo cambios significativos en la expresión total de p70S6K. El aumento de la fosforilación de AKT/mTOR/p70S6K sugirió que la vía de señalización PI3K/AKT/mTOR se activó en el cerebro post-TBI.

Los efectos de XFZY en la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR después de una lesión cerebral traumática.

(A,B) Los niveles de p-AKT disminuyeron significativamente el primer y tercer día en el tejido cerebral ipsilateral después de una lesión cerebral traumática. El tratamiento con 9 g/kg de XFZY redujo significativamente el aumento en la expresión de p-AKT desde el día 1 al 14 en comparación con el grupo Vehículo. La misma tendencia se observó en el grupo de 18 g/kg de XFZY los días 1, 3 y 14. Los niveles de expresión de p-AKT fueron significativamente más bajos en el grupo de 9 g/kg de XFZY en comparación con el grupo de 18 g/kg de XFZY en los días 7 y 14. No se detectaron cambios significativos en la expresión total de AKT entre el grupo Sham y Vehicle. (C,D) p-mTOR aumentó significativamente desde el día 1 al 14 después de la lesión cerebral traumática. El tratamiento con 9 g/kg de XFZY disminuyó significativamente la expresión de p-mTOR en comparación con el grupo Vehículo desde el día 1 al 14. El tratamiento con 18 g/kg de XFZY redujo significativamente p-mTOR el primer y tercer día. La expresión de mTOR en el grupo de 9 g/kg de XFZY se redujo significativamente en comparación con el grupo de 18 g/kg de XFZY en los días 1, 7 y 14. No hubo cambios significativos en el mTOR total en las comparaciones entre cada grupo. (E,F) p-p70S6K aumentó significativamente desde el día 1 al 14 después de la TBI. El tratamiento con 9 g/kg de XFZY redujo significativamente la expresión de p-p70S6K en los días anteriores. La misma tendencia se observó en el grupo de 18 g/kg de XFZY el primer día. La expresión de p-p70S6K se redujo significativamente en el grupo de 9 g/kg de XFZY en comparación con el grupo de 18 g/kg de XFZY en los días 3, 7 y 14. No se detectaron cambios significativos en la expresión total de p70S6K entre el grupo Sham y Vehicle. Los datos son la relación media entre las proteínas objetivo y la β-actina y se presentan como el porcentaje de cerebros tratados con XFZY (o Vehículo) sobre los cerebros tratados con Sham de control. Los datos representan la media de inducción ± SEM, según lo analizado por ANOVA. *p < 0,05, #p < 0,01 frente al grupo de vehículos. ∆p < 0,05, □p < 0,01 frente al grupo de 9 g/kg XFZY.

El tratamiento con 9 g/kg de XFZY disminuyó drásticamente el aumento de la fosforilación de AKT/mTOR/p70S6K en el hemisferio ipsilateral de ratas TBI durante todo el experimento (Fig. 7B,D,F), mientras que 18 g/kg de XFZY ocasionalmente ejercieron una inhibición similar de Fosforilación de AKT/mTOR/p70S6K (Fig. 7B: p-AKT, el día 1, 3 y 14; Fig. 7D: p-mTOR, el día 1 y 3; Fig. 7F: p-p70S6K, el día 1 día). También encontramos que 9 g/kg de XFZY redujeron notablemente la fosforilación de AKT/mTOR/p70S6K en ciertos momentos (Fig. 7B: p-AKT, el día 7 y 14; Fig. 7D: p-mTOR, el día 1). , día 7 y 14; Fig. 7F: p-p70S6K, día 3, 7 y 14). Los hallazgos anteriores demuestran que la inhibición de la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR fue más pronunciada después del tratamiento con 9 g/kg de XFZY que con 18 g/kg de XFZY. Además, casi no hubo diferencias notables en la expresión total de AKT/mTOR/p70S6K después del tratamiento con 9 g/kg o 18 g/kg de XFZY en comparación con el grupo Vehículo, excepto por los niveles reducidos de proteína AKT/p70S6K total en respuesta a 9 g/kg de XFZY el primer día y el aumento de la expresión total de AKT en respuesta a 18 g/kg el día 14 (Fig. 7B, F).

La respuesta inflamatoria es una de las principales causas de daño secundario tanto durante la fase aguda como crónica del TCE, especialmente en las contusiones cerebrales12,18. En este estudio, se encontró principalmente que la administración de XFZY después de una lesión cerebral traumática facilitó la recuperación de los déficits neurológicos y mejoró la función cognitiva. Además, en ratas con TBI se observó una reversión del aumento de la expresión de AA, factor proinflamatorio (TNF-α e IL-1β) y fosfo-AKT/mTOR/P70S6K en el tejido cerebral ipsilateral. Estos resultados mostraron que XFZY proporcionó una neuroprotección significativa contra la TBI a través de efectos antiinflamatorios resultantes de la inhibición de la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR activada. Curiosamente, la dosis clásica de XFZY (es decir, 9 g/kg en ratas), tal como la definió Qingren Wang de “Yilin Gaicuo”, proporcionó mejores efectos curativos que la dosis ultrarutinaria (es decir, 18 g/kg en ratas), que indicó que la dosis clásica utilizada en la MTC es científica y razonable.

La inflamación, que es bien conocida como un arma de doble filo, consta de fases inicial, perpetua y de resolución. La inflamación adaptativa es útil para la reparación de tejidos, mientras que los niveles excesivos de inflamación resultan directamente en daño secundario19. El ácido araquidónico (20:4ω6), un precursor de eicosanoides de primer nivel, se mantiene en un nivel celular estable gracias a una serie de enzimas. En el modelo de TBI, en respuesta al trauma mecánico, las células se activan para liberar un exceso de AA de los lípidos de la membrana, que son movilizados por las fosfolipasas (PLA2)42. Posteriormente, en células de mamíferos, el AA es metabolizado en prostaglandinas y leucotrienos por la ciclooxigenasa-2 (COX-2) y 5-lipoxigenasa (5-LO), respectivamente19,42. Las nuevas prostaglandinas sintéticas, como la prostaglandina E2 (PGE2) y la prostaciclina (PGI2), contribuyen a la infiltración inflamatoria, incluida la fuga de leucocitos polimorfonucleares (es decir, neutrófilos) y monocitos42. El leucotrieno B4 (LTB4) generado se transfiere fuera de la membrana celular como agente quimiotáctico inflamatorio para estimular la agregación de células inflamatorias, que ejerce efectos dañinos en ciertos lugares43. Los procesos anteriores se ven exacerbados por la alteración de la barrera hematoencefálica en la lesión cerebral traumática. Además, las abundantes prostaglandinas y leucotrienos que se originan a partir de AA resultan directamente en inflamación crónica19. En el presente estudio, el aumento de AA en el tejido cerebral ipsilateral persistió desde el día 1 al 14 después de la TBI y disminuyó gradualmente con el tiempo (Fig. 5C), como lo respalda el aumento de los niveles séricos de AA observados en la investigación metabonómica de TBI informada. por Shuguang Yang et al44. Estos resultados sugieren que la inflamación persistió continuamente hasta al menos el día 14 después de la LCT. Afortunadamente, el tratamiento con XFZY revirtió significativamente el aumento de los niveles de AA y una dosis de 9 g/kg fue más efectiva que 18 g/kg.

Durante una lesión cerebral traumática, las células inflamatorias derivadas periféricamente pueden proporcionar un efecto neuroprotector o agravar las reacciones de lesión secundaria desadaptativas con el tiempo. En primer lugar, los neutrófilos reclutados que están localizados en el área del daño cerebral se activan para liberar metaloproteinasas, proteasas, TNF-α y ROS12, acelerando aún más el reclutamiento de monocitos en el área dañada20, así como la activación de macrófagos y microglía45. Después de migrar al área de la lesión cerebral, los monocitos, leucocitos multipotentes derivados de la médula ósea, se convierten en macrófagos, que están relacionados con la eferocitosis de los granulocitos apoptóticos19. Después de una lesión cerebral traumática, la microglía, macrófagos del tejido innato residente en el SNC, se convierte al fenotipo M1. Este fenotipo posee una apariencia y funcionalidad análogas a los macrófagos derivados de monocitos46, que se caracterizan por una respuesta proinflamatoria y actividades antimicrobianas47. Además, las sustancias perniciosas que se liberan por la muerte neuronal o glial exacerban la lesión secundaria, estableciendo así un círculo vicioso de acontecimientos. Estos procesos fisiopatológicos dan lugar a una serie de citoquinas, ROS, purinas, factores de crecimiento, aminoácidos excitadores y moléculas de patrones moleculares asociados al daño (DAMP)12, que pueden activar un grupo diverso de vías de señalización en el estado de hiperactivación inducido por la TBI.

La evidencia emergente sugiere que la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR se activa en el parénquima cerebral después de una LCT27,28,29. AKT se activa principalmente mediante la modulación de PI3K aguas arriba y su grado de fosforilación refleja indirectamente los niveles de PI3K activo. Después de una lesión cerebral traumática, la estimulación de BCR, TCR, receptores de citoquinas y receptores tipo peaje (TLR) mediante señales que se liberan en respuesta a un trauma cerebral activan las moléculas adaptadoras de tirosina quinasa que están presentes en la membrana celular para reclutar la subunidad p85 de PI3K, que contribuye a la activación de PI3K para catalizar la transformación de fosfatidilinositol 4,5-bisfosfato (PIP2) en fosfatidilinositol 3,4,5-trifosfato (PIP3)24. PIP3, como segundo mensajero, recluta AKT y PDK1 en la membrana celular y fosforila objetivos posteriores, incluido AKT. En consecuencia, AKT es activado por PDK1. La AKT fosforilada da como resultado la activación directa de mTOR por el sustrato AKT/PKB rico en prolina de 40 kD (PRAS40) o la activación indirecta por el complejo proteico de la esclerosis tuberosa (TSC) y el homólogo de Ras enriquecido en el cerebro (Rheb)8,48. mTOR, una proteína quinasa de serina-treonina ubicua, regula varias funciones celulares importantes que están involucradas en la transcripción, el recambio de ARNm, la traducción y la estabilidad de las proteínas. La regulación de la traducción es su función mejor caracterizada en células de mamíferos49. La quinasa ribosómica S6 p70 (p70S6K) es un sustrato clave para controlar la proporción de traducción del ARNm50. En nuestro estudio, aunque se observó un aumento notable en la fosforilación de AKT el primer y tercer día después de la TBI, la fosforilación de mTOR/p70S6K, los objetivos posteriores de AKT, aumentó significativamente en ratas tratadas con CCI desde el día 1 al 14. Fig. 7), lo que sugirió que la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR se activó en el hemisferio ipsilateral lesionado desde el día 1 al 14. Un número cada vez mayor de estudios ha demostrado que la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR activada produce una mayor producción de citocinas proinflamatorias (p. ej., TNF-α e IL-1β) y el reclutamiento de neutrófilos y monocitos25,30, así como microglía activada23.

Es evidente que el TBI induce una neuroinflamación amplificada y prolongada que influye negativamente en los procesos cognitivos y conductuales. El TNF-α y los aumentos de IL-1β se han descrito en el TCE y los eventos adversos asociados y, potencialmente, pueden provocar daño neuronal secundario51,52. Ambas son las citoquinas clave como reguladores maestros de los procesos neuroinflamatorios posteriores a una TCE51,52. La sobreproducción de TNF-α e IL-1β en la neuroinflamación crónica después de una lesión cerebral traumática puede contribuir a la alteración de los déficits sinápticos y de plasticidad de la función cognitiva1. Por lo tanto, la reducción de TNF-α e IL-1β elevados puede restaurar la función neuronal y revertir los déficits cognitivos posteriores a una lesión cerebral traumática. En el presente estudio, el TNF-α y la IL-1β aumentaron significativamente en el tejido cerebral ipsilateral desde el día 1 al 14 después de la lesión cerebral traumática (Fig. 6). Además, observamos niveles máximos de TNF-α e IL-1β en el tercer y primer día, respectivamente, después de una lesión cerebral traumática. Estos resultados son consistentes con informes anteriores10,22. Los niveles elevados de citoquinas proinflamatorias (p. ej., TNF-α e IL-1β) que se liberaron en el cerebro después de una lesión cerebral traumática dieron como resultado la expansión del daño secundario. La inhibición de la regulación positiva de la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR suprimió dramáticamente la producción de citocinas proinflamatorias (p. ej., TNF-α e IL-1β) en los tejidos cerebrales23,31 y este efecto estuvo acompañado de mejoras en el post -déficits conductuales por lesiones, incluidas las funciones neurológicas y cognitivas23,28,49. Este fenómeno puede estar relacionado con uno de los mecanismos moleculares que pueden ser atribuibles a la sobreproducción de TNF-α e IL-1β en la neuroinflamación durante el TCE. El TNF-α superfluo durante la neuroinflamación contribuye a los déficits en la función cognitiva mediante la reducción de las corrientes NMDAR postsinápticas53, lo que se ve respaldado por la capacidad de la inhibición de la síntesis de TNF-α para restaurar la función neuronal y revertir los déficits cognitivos inducidos por la neuroinflamación53,54. De manera análoga, una elevación sostenida de los niveles de IL-1β en el hipocampo indujo el deterioro de la memoria espacial55, mientras que la neutralización de IL-1β en el modelo CCI mejoró los resultados cognitivos56. Se observaron resultados similares en nuestro estudio después del tratamiento con XFZY (9 g/kg y 18 g/kg), que inhibió la vía de señal PI3K-AKT-mTOR activada al reducir los niveles de fosforilación de AKT/mTOR/p70S6K (Fig. 7). , disminuyendo así la sobreproducción de TNF-α e IL-1β (Fig. 6) y aliviando el deterioro de los resultados neurológicos (Fig. 3) y de la memoria espacial (Fig. 4). Los resultados anteriores respaldan la especulación de que XFZY mejoró significativamente los comportamientos (funciones neurológicas o cognitivas) mediante la supresión de la sobreproducción de citocinas proinflamatorias mediante la inhibición de la vía de señalización activada PI3K-AKT-mTOR.

Este es el primer estudio que dilucida el mecanismo neuroprotector subyacente a los efectos antiinflamatorios de XFZY en un modelo de TBI en ratas (Fig. 8). XFZY revirtió el aumento de los niveles de AA causado por el trauma, lo que implica que el reclutamiento de células inflamatorias por las prostaglandinas o leucotrienos se redujo en la lesión cerebral. La inhibición de la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR por XFZY dio como resultado una producción reducida de citoquinas proinflamatorias, potencialmente debido a efectos sobre los neutrófilos activados, monocitos, microglía y/u otros factores en el parénquima cerebral lesionado después de una lesión cerebral traumática. El efecto de XFZY sobre la neutralización del desequilibrio de las citoquinas proinflamatorias fue beneficioso para mejorar las funciones neurológicas y cognitivas.

Respuesta inflamatoria en el cerebro después de una lesión cerebral traumática y mecanismo patogénico del efecto antiinflamatorio de XFZY.

Después de una lesión cerebral traumática, la membrana celular estimulada por una lesión mecánica libera ácido araquidónico (AA), que se metaboliza en prostaglandina E2 (PGE2) y prostaciclina (PGI2) por la ciclooxigenasa-2 (COX-2) y en leucotrienos (LTB4) por la 5-lipoxigenasa. (5-LO). Los tres mediadores inflamatorios inician la inflamación aguda, incluidos cambios en el flujo sanguíneo, aumento de la permeabilidad capilar y reclutamiento de células inflamatorias en la zona ambitus de la lesión cerebral, incluidos los leucocitos polimorfonucleares (es decir, neutrófilos) y monocitos. El exceso de prostaglandinas y leucotrienos contribuye a la inflamación crónica. Los neutrófilos se activan para liberar aún más factores quimiotácticos, devorar tejido necrótico y esterilizar bacterias. La afluencia de monocitos y células microgliales residentes se convierte en macrófagos, que secretan factores proinflamatorios (p. ej., TNF-α e IL-1β) y consumen cuerpos extraños, tejido necrótico o células apoptóticas (p. ej., eferocitosis). XFZY suprimió significativamente los niveles elevados de AA, TNF-α e IL-1β en sangre en el tejido cerebral, lo que indica que XFZY posee efectos antiinflamatorios. Para apuntar a la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR, XFZY revirtió significativamente la fosforilación elevada de AKT/mTOR en el tejido cerebral después de una lesión cerebral traumática, así como la p70S6K aguas abajo, lo que resultó en una relación de traducción reducida de factores inflamatorios y ejerció efectos antiinflamatorios. .

En particular, la neuroprotección conferida por la dosis clásica de XFZY (9 g/kg) fue superior a una dosis ultrarutinaria (18 g/kg) en su capacidad para reducir los mediadores inflamatorios y mejorar el rendimiento conductual, lo que indica que la dosis clásica de La prescripción de la MTC, que se basa en la práctica clínica a largo plazo, es científica y razonable. En el presente estudio, se definió 9 g/kg como la dosis clásica de XFZY según el principio de que la dosis en la rata es 6,7 veces mayor que la del ser humano, como se describe en “Yilin Gaicuo”57. Duplicamos la dosis clásica (18 g/kg) como dosis ultrarutinaria para comparar los diferentes efectos curativos. Estos son los primeros resultados que demuestran que la dosis clásica de XFZY tuvo efectos más beneficiosos que la dosis ultrarutinaria en términos de neuroprotección contra el TBI. Estos resultados aclaran parcialmente una dosis óptima de XFZY para efectos neuroprotectores, considerando que el complejo XFZY consta de miles de compuestos y que los cambios en la dosis pueden influir en las interacciones de los compuestos activos absorbidos in vivo según la terapia multiobjetivo32. La dosis clásica puede estar muy cerca de la dosis óptima en comparación con la dosis ultrarutinaria, pero los detalles sobre el mecanismo correspondiente requieren confirmación adicional en un estudio en curso.

Este estudio tiene varias limitaciones. Aunque se reconoce universalmente que XFZY es una MTC clásica, que puede tener docenas de composiciones químicas diferentes, las composiciones bioactivas absorbidas derivadas de XFZY que ejercieron funciones protectoras en el cerebro siguen sin estar claras. Además, se desconoce la forma en que se inhibió la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR activada en las células inflamatorias del parénquima cerebral después de una lesión cerebral traumática. Se requieren investigaciones adicionales para dilucidar los mecanismos subyacentes a estos fenómenos.

En resumen, XFZY ejerce efectos neuroprotectores al neutralizar la neuroinflamación causada por una lesión cerebral traumática y mejorar los efectos sobre las funciones neurológicas y cognitivas después de la lesión al inhibir la vía de señalización PI3K-AKT-mTOR. Este es el primer estudio que verifica la superioridad de la dosis clásica de XFZY en comparación con una dosis ultrarutinaria para el tratamiento de TBI desde la perspectiva de las vías antiinflamatorias, que son más valiosas para la aplicación clínica de XFZY para el tratamiento de pacientes con TCE. El presente estudio demostró que XFZY podría ser una opción terapéutica potencialmente prometedora para el tratamiento de la lesión cerebral traumática.

Los extractos de decocción de XFZY (Prunus persica (L.) Batsch, Carthamus tinctorius L., Angelicae sinensis (Oliv.) Diels, Rehmannia glutinosa Libosch., Achyranthes bidentata Bl., Paeonia lactiflora Pall., Citrus aurantium L., Glycyrrhiza uralensis Fisch ., Ligusticumi chuanxiong Hort., Platycodon grandiflorum (Jacq.) A. DC. y Bupleurum chinense DC. en una proporción de 8:6:6:6:6:4:4:4:3:3:2) para medicinas vegetales crudas. Se compraron en la farmacia del Hospital Xiangya de la Universidad Central Sur, provincia de Hunan, República Popular China. Cada hierba fue autenticada por el botánico medicinal a base de hierbas, el profesor SY Hu, del Departamento de medicina herbaria china de la Universidad Central Sur. Guardamos las muestras del comprobante (NO. 20140039) en el Hospital Xiangya de la Universidad Central del Sur (Changsha, China). Las once hierbas de XFZY con las proporciones anteriores se utilizaron para generar un polvo liofilizado de XFZY según un proceso estándar58. Finalmente, se determinó que 1 g del polvo liofilizado contenía 5,2 g de hierbas crudas. Se almacenó a 4 °C antes de disolverse con agua destilada para su uso, según el estándar de 1 g/ml (p/v).

Se utilizó el sistema Shimadzu LCMS-IT-TOF (Tokio, Japón) en modo de iones positivos con una fuente de ionización por electropulverización (ESI). Se empleó un Shim-Pack XR-ODS (columna C18 (2,0 mm de diámetro interno x 75 mm, 1,6 μm, Shim) para la separación por cromatografía y ácido fórmico al 0,1% en agua (A) y acetonitrilo (B) a un caudal de 0,4 ml. /min se usó para establecer el gradiente de elución (17% B durante 0–2,0 min, 17%–35% B durante 2,0–3,0 min, 35%–44% B durante 3,0–7,0 min, 44%–55% B durante 7,0–9,0 min, 55 %–60 % B durante 9,0–14,0 min, 60 %–63 % B durante 14,0–17,0 min y 63 %-68 % B durante 17,0–19,0 min). La temperatura de la columna se fijó en 40 ° C. El volumen de inyección de la muestra fue de 5 μL. Las longitudes de onda de detección oscilaron entre 190 nm y 800 nm. Se utilizaron los siguientes parámetros para la MS analítica: voltaje de interfaz, 4,5 kV, voltaje ESI, 1,6 kV, caudal de gas nebulizador (N2), 1,5 L/min; presión de trampa de iones, 1,8 × 10-2 Pa; temperatura de interfaz, 200 °C; presión del gas de secado, 100 kPa; tiempo de acumulación de iones, 30 ms. Se aplicó argón de pureza ultra alta para la disociación inducida por colisión ( CID) La solución estándar mencionada anteriormente de 1 g/ml de XFZY se centrifugó durante 10 minutos (16.000 rpm, 4 °C). La capa superior se filtró a través de un filtro de nailon de 0,22 µm. El lixiviado se diluyó dos veces con agua destilada y luego se inyectó en el LCMS-IT-TOF.

El Centro de Investigación de Animales de Laboratorio de la Universidad Central Sur suministró ratas macho Sprague-Dawley (SD) que pesaban entre 200 y 250 g. Se mantuvieron en condiciones estándar durante al menos 1 semana y luego se ayunaron durante 12 h con libre acceso a comida y agua antes de cada experimento. Todos los experimentos con animales fueron aprobados por el Comité de Ética Animal de la Universidad Central Sur y cumplieron con las Directrices para el cuidado y uso de animales de laboratorio.

El modelo de rata de impacto cortical controlado (CCI) se realizó utilizando un dispositivo de impacto neumático controlado electrónicamente (TBI 0310, Precision Systems & Instrumentation, Fairfax Station, VA) según un informe anterior58. Los parámetros demandados para este aparato fueron los siguientes: profundidad del impacto, 5,0 mm desde la superficie cortical; velocidad de impacto, 6,0 m/seg; tiempo de permanencia, 500 ms. Las ratas fueron anestesiadas por vía intraperitoneal con pentobarbital al 3% (50 mg/kg). En condiciones estériles, se creó una incisión longitudinal en la línea media sobre el cráneo y se generó una craneotomía de 5 mm utilizando un taladro portátil y un trépano sobre la corteza parietal izquierda (el centro de las coordenadas de la craneotomía en relación con el bregma: 1 mm posterior, 1 mm lateral) y se retiró el colgajo óseo. Luego, las ratas fueron sometidas a CCI en el grupo TBI, mientras que no se aplicó ningún traumatismo de la corteza cerebral en el grupo simulado. El cuero cabelludo se cerró utilizando pegamento tisular de cianoacrilato. Durante toda la cirugía, la temperatura corporal de las ratas se controló y mantuvo en 37,0 ± 0,5 °C.

Como se muestra en la Fig. 1, las ratas se clasificaron aleatoriamente en seis grupos: (1) Operación simulada (simulada, n = 44): ratas que se sometieron al procedimiento CCI sin traumatismo en la corteza y se les administró NaCl al 0,9 %; (2) TBI + Vehículo (Vehículo, n = 44): ratas que se sometieron a CCI y recibieron la misma cantidad de solución salina por vía intragástrica; (3) TBI + 9 g/kg XFZY (9 g/kg XFZY, n = 44): ratas CCI que recibieron XFZY (9 g/kg) por vía oral; (4) TBI + 18 g/kg XFZY (18 g/kg XFZY, n = 44): ratas CCI que recibieron XFZY (18 mg/kg) por vía oral; (5) Simulado + 9 g/kg XFZY (Sham 9 g/kg XFZY, n=8): ratas del grupo simulado que recibió XFZY (9 g/kg) por vía oral; (6) Sham + 18 g/kg XFZY (Sham 18 g/kg XFZY, n = 8): ratas del grupo simulado que recibieron XFZY (18 g/kg) por vía oral. El régimen de dosificación para cada grupo se aplicó de forma continua una vez al día después de la TBI. El día 1, 3, 7 y 14 después de la TBI, se extrajeron aleatoriamente 8 ratas de cada grupo, excepto los grupos simulados de 9 g/kg XFZY y simulados de 18 g/kg XFZY. Luego, los roedores fueron sacrificados para la recolección de muestras después de las pruebas de función neurológica. Las 12 ratas restantes de cada grupo mencionado anteriormente fueron examinadas para evaluar las puntuaciones de la función neurológica los días 1, 3, 7, 14 y 21 después de la lesión cerebral traumática. Estas 12 ratas en cada grupo y 8 ratas en cada uno de los grupos XFZY simulados (9 g/kg o 18 g/kg) se sometieron a pruebas de MWM del día 17 al 21.

Después de la ejecución por dislocación cervical, se extirparon rápidamente los hemisferios ipsilaterales. Después de enjuagar la sangre superficial con NaCl al 0,9% helado, las muestras se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a -80 °C hasta los ensayos bioquímicos y la determinación de AA mediante GC-MS.

Las muestras de cerebro se extrajeron según Hongfei Yue et al59, con modificaciones. Brevemente, se mezclaron 20 mg de trozos de tejido cerebral con 200 μl de metanol y 2 μl de ácido fórmico. Después de la homogeneización utilizando un homogeneizador (TissueLyser LT, alemán), las mezclas se clarificaron mediante centrifugación. La capa superior se diluyó en 1,8 ml de agua destilada. El sobrenadante se cargó en cartuchos de extracción en fase sólida (SPE) Oasis®HLB (Maliford, MA, EE. UU.), que luego se lavaron con 3 ml de agua destilada y 1 ml de metanol al 10 % y se secaron en condiciones de vacío. Los analitos obtenidos se evaporaron hasta sequedad con gas N2. El extracto seco se disolvió y se agitó y la mezcla resultante se calentó constantemente a 70 °C durante 1 h. A continuación, se añadieron a la solución 100 µl de N,O-bistrimetilsililtrifluoroacetamida (BSTFA) y el catalizador 1% de trimetilclorosilano (TMCS). Finalmente, la solución mixta se calentó y se desvió al microvial de GC para el análisis de GC-MS.

Después de la extracción y derivatización, se inyectó 1,0 μL de la solución de muestra en una proporción dividida de 1:10 en un GC/MS (Kyoto, Japón). La temperatura de la columna se mantuvo a 70 °C durante 4 min y luego se aumentó a 300 °C en incrementos de 1,0 ml/min y se mantuvo durante 3 min. La temperatura de inyección se fijó en 280 °C, con desatornillado de la purga del tabique a un caudal de 3 ml/min. La temperatura de la interfaz fue de 250 °C y la temperatura de la fuente de iones fue de 200 °C. Se utilizó helio como gas portador a un caudal de 1 ml/min. Se utilizó un haz de electrones de 70 eV para lograr la ionización en modo de barrido completo (m/z 35–800). Después de un tiempo de retardo de solvente de 6 minutos, la masa de AA se identificó bajo 0,9 kV de voltaje del detector en comparación con el AA de referencia (St. Louis, MO, EE. UU.) utilizando espectros de masas y tiempos de retención similares.

Las muestras de cerebro descongeladas se pesaron, diseccionaron y homogeneizaron en 9 volúmenes (1:9, p/v) de solución salina normal helada. Los homogeneizados se centrifugaron durante 15 min (3000 rpm, 4 °C). Los sobrenadantes se usaron para medir los contenidos de TNF-α e IL-1β según las instrucciones del fabricante (CUSABIO, Wuhan, China). Las concentraciones de proteínas tisulares se midieron utilizando el método de Bradford.

Se sumergió un peso exacto de 0,2 g de tejido cerebral una vez en solución salina tamponada con fosfato (BPS) enfriada con hielo 0,1 M. Después del secado al aire, el tejido se colocó en 500 µl de tampón de lisis RIPA enfriado con hielo con inhibidores de proteasa para preparar los homogeneizados de tejido. Después de 30 minutos en hielo, los homogeneizados se centrifugaron durante 5 minutos (12.000 rpm, 4 °C) y los sobrenadantes se recogieron para usarlos como soluciones de muestra para análisis de transferencia Western, como se describe en un estudio previo31. Se eliminaron soluciones de muestra adecuadas para medir las concentraciones de proteína total utilizando el método del ácido bicinconínico (BCA). Las membranas se incubaron con los siguientes anticuerpos primarios: AKT (1:2000; Cell Signaling Technology, Boston), fosfo-AKT (1:2000; Cell Signaling Technology, Boston), mTOR (1:1000; Cell Signaling Technology, Boston) , fosfo-mTOR (1:100; Cell Signaling Technology, Boston), fosfo-p70S6K (1:200; Santa Cruz Biotechnology, California), p70S6K (1:1000; Cell Signaling Technology, Boston) y β-actina (1: 4.000; Biotecnología de Santa Cruz, California). La densidad de banda se cuantificó utilizando el software Image J. La cantidad de expresión de proteínas se presenta en relación con los niveles de β-actina.

La mNSS se realizó como se describe en un estudio previo60. El mNSS incluye una serie de pruebas compuestas para evaluar las capacidades motoras (estado muscular, movimientos anormales), sensoriales (visuales, táctiles y propioceptivas) y reflejas utilizando un conjunto de elementos de prueba. Se otorga un punto por no realizar una tarea particular o por la ausencia de un reflejo probado. Por tanto, una puntuación más alta indica una lesión más grave (puntuación normal: 0; puntuación de déficit máximo: 18). Después de una lesión cerebral traumática, se evaluó el mNSS los días 1, 3, 7, 14 y 21 para determinar la gravedad de la lesión.

Las pruebas cognitivas se realizaron en un MWM como se describió anteriormente29. Brevemente, las ratas se colocaron en el tanque contiguo a la pared desde una de las ubicaciones iniciales espaciadas equivalentemente, que se cambiaron estocásticamente en cada prueba. El día 21, se realizó una prueba de sonda espacial para evaluar la fuerza de la retención de la memoria espacial al retirar la plataforma. Para lograr este objetivo, se colocó a las ratas en el mismo lugar inicial frente a la pared y luego se les permitió nadar libremente durante 60 segundos en la piscina sin plataforma para calcular el tiempo que permanecieron en la zona del cuadrante objetivo, en la que se colocó la plataforma durante senderos de adquisición, indicando así el grado de consolidación de la memoria que se produjo después del aprendizaje. Los parámetros de comportamiento se rastrearon y analizaron utilizando el sistema de seguimiento de video ANY-maze (Stoelting Co., EE. UU.).

Todos los datos se presentan como media ± SEM. Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el paquete de software SPSS 11.0 o Prism 5.0 (GraphPad) o SAS. Se empleó un ANOVA de medidas repetidas (RM ANOVA) para mNSS. Para el análisis estadístico de las puntuaciones de MWM se utilizaron el modelo mixto RM ANOVA y el RM ANOVA de dos factores (grupo × tiempo). Los datos bioquímicos restantes se analizaron mediante ANOVA de dos vías. La significación estadística se definió como p < 0,05.

Cómo citar este artículo: Xing, Z. et al. La decocción de Xuefu Zhuyu, una medicina tradicional china, proporciona neuroprotección en un modelo de lesión cerebral traumática en ratas a través de una vía antiinflamatoria. Ciencia. Rep. 6, 20040; doi: 10.1038/srep20040 (2016).

Feigin, VL y cols. Incidencia de lesión cerebral traumática en Nueva Zelanda: un estudio poblacional. Lanceta Neuro. 12, 53–64 (2013).

Artículo de Google Scholar

Wright, DW y cols. Administración muy temprana de progesterona para la lesión cerebral traumática aguda. N. inglés. J. Med. 371, 2457–2466 (2014).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Lozano, D. et al. Respuestas neuroinflamatorias a la lesión cerebral traumática: etiología, consecuencias clínicas y oportunidades terapéuticas. Neuropsiquiatra. Dis. Tratar. 11, 97-106 (2015).

CAS PubMed PubMed Central Google Académico

Kou, K., Hou, XY, Sun, JD y Chu, K. Manejo actual de lesiones cerebrales traumáticas prehospitalarias en China. Mundo J. Emerg. Medicina. 5, 245–254 (2014).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Alluri, H. y col. Disfunción de la barrera hematoencefálica tras una lesión cerebral traumática. Metab. Cerebro. Dis. 30, 1093-1104 (2015).

Artículo PubMed Google Scholar

Lin, C. y col. Eficacia de la progesterona para la lesión cerebral traumática de moderada a grave: un metanálisis de ensayos clínicos aleatorios. Ciencia. Rep. 5, 13442 (2015).

Artículo CAS ADS PubMed PubMed Central Google Scholar

Cheng, T. y col. El trasplante de gelatina de Wharton mejora la función neurológica en un modelo de lesión cerebral traumática en ratas. Molino celular. Neurobiol. 35, 641–649 (2015).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Don, AS et al. Dirigirse a mTOR como una nueva estrategia terapéutica para las lesiones traumáticas del SNC. Droga. Descubrimiento. Hoy 17, 861–868 (2012).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Algattas, H. & Huang, JH Fisiopatología y tratamientos de la lesión cerebral traumática: fases temprana, intermedia y tardía posteriores a la lesión. En t. J. Mol. Ciencia. 15, 309–341 (2014).

Artículo CAS Google Scholar

Morganti, JM y cols. El antagonismo de CCR2 altera la polarización de los macrófagos cerebrales y mejora la disfunción cognitiva inducida por una lesión cerebral traumática. J. Neurosci. 35, 748–760 (2015).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kumar, A. & Loane, DJ Neuroinflamación después de una lesión cerebral traumática: oportunidades para la intervención terapéutica. Cerebro. Comportamiento. Inmune. 26, 1191-1201 (2012).

Artículo PubMed Google Scholar

Corps, KN, Roth, TL & McGavern, DB Inflamación y neuroprotección en lesiones cerebrales traumáticas. JAMA. Neurol. 72, 355–362 (2015).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Abdul-Muneer, PM, Chandra, N. y Haorah, J. Interacciones del estrés oxidativo y la inflamación neurovascular en la patogénesis de la lesión cerebral traumática. Mol. Neurobiol. 51, 966–979 (2014).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Dai, SS y col. El nivel local de glutamato dicta la regulación del receptor de adenosina A2A de la neuroinflamación y la lesión cerebral traumática. J. Neurosci. 30, 5802–5810 (2010).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Chodobski, A., Zink, BJ y Szmydynger-Chodobska, J. Fisiopatología de la barrera hematoencefálica en la lesión cerebral traumática. Traducción Res. Accidente cerebrovascular 2, 492–516 (2011).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Cafferty, WB, Yang, SH, Duffy, PJ, Li, S. y Strittmatter, SM Regeneración axonal funcional a través de cicatrices astrocíticas modificadas genéticamente para digerir proteoglicanos de sulfato de condroitina. J. Neurosci. 27, 2176–2185 (2007).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Rosi, S. y col. La neuroinflamación altera el patrón del hipocampo de expresión de Arc inducida por el comportamiento. J. Neurosci. 25, 723–731 (2005).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Maas, AIR, Stocchetti, N. & Bullock, R. Lesión cerebral traumática moderada y grave en adultos. Lanceta Neurol. 7, 728–741 (2008).

Artículo PubMed Google Scholar

Buckley, CD, Gilroy, DW y Serhan, CN Mediadores lipídicos y mecanismos de resolución de la inflamación aguda. Inmunidad 40, 315–327 (2014).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Kolaczkowska, E. & Kubes, P. Reclutamiento y función de neutrófilos en la salud y la inflamación. Nat. Rev. Immunol. 13, 159-175 (2013).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Ziebell, JM & Morganti-Kossmann, MC Participación de citocinas y quimiocinas pro y antiinflamatorias en la fisiopatología de la lesión cerebral traumática. Neuroterapéutica 7, 22–30 (2010).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Zhai, PP y cols. La reducción de las respuestas inflamatorias mediante el tratamiento con l-serina conduce a la neuroprotección en ratones después de una lesión cerebral traumática. Neurofarmacología 95, 1-11 (2015).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Ding, K. y col. La melatonina redujo la activación microglial y alivió la degeneración neuronal inducida por la neuroinflamación en una lesión cerebral traumática experimental: posible participación de la vía mTOR. Neuroquímica. Internacional 76, 23-31 (2014).

Artículo CAS Google Scholar

Weichhart, T. & Saemann, MD La vía PI3K/Akt/mTOR en células inmunes innatas: aplicaciones terapéuticas emergentes. Ana. Reuma. Dis. 67 iiiS3, 70–74 (2008).

Luo, L. y col. Rab8a interactúa directamente con PI3Kgamma para modular la señalización PI3K y mTOR impulsada por TLR4. Nat. Comunitario. 5, 4407 (2014).

Artículo CAS ADS PubMed Google Scholar

Dazert, E. y Hall, MN Señalización mTOR en enfermedades. actual. Opinión. Celúla. Biol. 23, 744–755 (2011).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Chen, S. y col. Alteraciones en las vías de señalización de la rapamicina en los mamíferos después de una lesión cerebral traumática. J. Cereb. Circulación sanguínea. Metab. 27, 939–949 (2007).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Park, J. y col. La terapia combinada dirigida a Akt y al objetivo de la rapamicina en los mamíferos mejora el resultado funcional después del impacto cortical controlado en ratones. J. Cereb. Circulación sanguínea. Metab. 32, 330–340 (2012).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Zhu, X. y col. Papel de Akt y el objetivo de la rapamicina en los mamíferos en el resultado funcional después de una lesión cerebral por conmoción cerebral en ratones. J. Cereb. Circulación sanguínea. Metab. 34, 1531-1539 (2014).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Ma, C. y col. Efectos antiinflamatorios del extracto acuoso de mano de Taraxacum mongolicum.-Mazz sobre la inflamación inducida por lipopolisacáridos en la lesión pulmonar aguda al suprimir la vía de señalización PI3K/Akt/mTOR. J. Etnofarmacol. 168, 349–355 (2015).

Artículo PubMed Google Scholar

Lu, Q. y col. La inhibición del objetivo de la rapamicina en los mamíferos mejora el déficit neuroconductual y modula la respuesta inmune después de una hemorragia intracerebral en ratas. J. Neuroinflamación 11, 44 (2014).

Artículo ADS CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Sucher, Nueva Jersey La aplicación de la medicina china al descubrimiento de nuevos fármacos. Experto. Opinión. Droga. Descubrimiento. 8, 21–34 (2013).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Wang, J. y col. Los efectos de xuefu zhuyu y shengmai sobre la evolución de síndromes y marcadores inflamatorios en pacientes con angina de pecho inestable después de una intervención coronaria percutánea: un ensayo clínico controlado aleatorio. J. Alternativa complementaria basada en evidencia. Medicina. 2013, 896467 (2013).

Google Académico

Teng, F., Li, G., Liu, Z., Zhang, L. y Yao, K. El estudio comparativo sobre la expresión de la transducción de señales SIRT1 mediante la cápsula Xuefuzhuyu. J. Alternativa complementaria basada en evidencia. Medicina. 2014, 537014 (2014).

Google Académico

Wang, N. y col. La decocción de Xuefuzhuyu y el astrágalo previenen la lesión cerebral hipóxico-isquémica. Neural. Regeneración. Res. 6, 1635-1639 (2011).

Google Académico

Sun, M. y col. Observación clínica sobre el tratamiento del trastorno mental traumático poscraneocerebral mediante la medicina integrativa. Mentón. J. Integral. Medicina. 14, 137-141 (2008).

Artículo PubMed Google Scholar

Huang, X. 42 casos de observación clínica de Xuefu Zhuyu en pacientes con lesión cerebral traumática. Zhongguo Zhong Yi Ji Zheng 15, 121, 144 (2006).

Anuncios Google Scholar

Wang, ZW 108 casos de observación clínica de Xuefu Zhuyu en pacientes con síndrome traumático poscraneocerebral. Shanxi Zhong Yi 31, 850–850 (2010).

CAS Google Académico

Sun, X., Wei, X., Qu, S., Zhao, Y. y Zhang, X. Hydroxysafflor Yellow A suprime la generación de trombina y las respuestas inflamatorias después de una isquemia-reperfusión cerebral focal en ratas. Bioorg. Medicina. Química. Letón. 20, 4120–4124 (2010).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Hwang, HJ, Lee, HJ, Kim, CJ, Shim, I. & Hahm, DH Efecto inhibidor de la amigdalina sobre la expresión del ARNm de TNF-alfa e IL-1beta inducible por lipopolisacáridos y la artritis de rata inducida por carragenina. J. Microbiol. Biotecnología. 18, 1641-1647 (2008).

CAS PubMed Google Académico

Paoletti, I. et al. Los análogos de amigdalina inhiben la señalización de IFN-gamma y reducen la respuesta inflamatoria en los queratinocitos epidérmicos humanos. Inflamación 36, 1316-1326 (2013).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Funk, CD Prostaglandinas y leucotrienos: avances en la biología de los eicosanoides. Ciencia 294, 1871–1875 (2001).

Artículo CAS ADS PubMed Google Scholar

Steiner, N. y col. Neuroprotección de las células Neuro2a y el modo de acción antiinflamatorio y supresor de citocinas del resveratrol en macrófagos RAW264.7 activados y microglía C8-B4. Neuroquímica. En t. 10.1016/j.neuint.2015.10.013 (2015).

Yang, S. y col. Ácido araquidónico: un puente entre la lesión cerebral traumática y la curación de fracturas. J. Neurotrauma 29, 2696–2705 (2012).

Artículo PubMed Google Scholar

Kenne, E., Erlandsson, A., Lindbom, L., Hillered, L. y Clausen, F. El agotamiento de neutrófilos reduce la formación de edema y la pérdida de tejido después de una lesión cerebral traumática en ratones. J. Neuroinflamación 9, 17 (2012).

Artículo PubMed PubMed Central Google Scholar

Mizutani, M. y col. El receptor de fractalquina, pero no el CCR2, está presente en la microglía desde el desarrollo embrionario hasta la edad adulta. J. Inmunol. 188, 29–36 (2012).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Lawrence, T. y Natoli, G. Regulación transcripcional de la polarización de los macrófagos: permitir la diversidad con identidad. Nat. Rev. Immunol. 11, 750–761 (2011).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Hoeffer, CA y Klann, E. Señalización mTOR: en la encrucijada de la plasticidad, la memoria y la enfermedad. Tendencias Neurociencias. 33, 67–75 (2010).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Erlich, S., Alexandrovich, A., Shohami, E. y Pinkas-Kramarski, R. La rapamicina es un tratamiento neuroprotector para la lesión cerebral traumática. Neurobiol. Dis. 26, 86–93 (2007).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Klann, E. & Dever, TE Mecanismos bioquímicos para la regulación traslacional en la plasticidad sináptica. Nat. Rev. Neurociencias. 5, 931–942 (2004).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Baratz, R. y col. La reducción transitoria de la síntesis del factor de necrosis tumoral α mejora la pérdida de células neuronales y los deterioros cognitivos inducidos por una lesión cerebral traumática mínima en ratones. J. Neuroinflamación. 12, 45 (2015).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Brough, D. Tyrrell, PJ y Allan, SM Regulación de la interleucina-1 en la lesión cerebral aguda. Tendencias. Farmacéutico. Ciencia. 32, 617–622 (2011).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Wang, J. y col. El L-treonato de magnesio previene y restaura los déficits de memoria asociados con el dolor neuropático mediante la inhibición del TNF-alfa. Médico del dolor 16, E563–575 (2013).

PubMed Google Académico

Belarbi, K. et al. El inhibidor de la síntesis de proteína TNF-alfa restaura la función neuronal y revierte los déficits cognitivos inducidos por la neuroinflamación crónica. J. Neuroinflamación 9, 23 (2012).

Artículo CAS PubMed PubMed Central Google Scholar

Moore, AH, Wu, M., Shaftel, SS, Graham, KA y O'Banion, MK La expresión sostenida de interleucina-1beta en el hipocampo del ratón afecta la memoria espacial. Neurociencia 164, 1484-1495 (2009).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Clausen, F. y col. La neutralización de la interleucina-1beta reduce el edema cerebral y la pérdida de tejido y mejora el resultado cognitivo tardío después de una lesión cerebral traumática en ratones. EUR. J. Neurosci. 34, 110-123 (2011).

Artículo PubMed Google Scholar

Pinkel, D. El uso de la superficie corporal como criterio de dosificación de fármacos en la quimioterapia contra el cáncer. Res. Cáncer. 18, 853–856 (1958).

CAS PubMed Google Académico

Wang, W. y col. Efectos protectores de la medicina herbaria china Rhizoma drynariae en ratas después de una lesión cerebral traumática e identificación del compuesto activo. Mol. Neurobiol. 10.1007/s12035-015-9385-x (2015).

Yue, H. y col. Un método de cromatografía líquida/espectrometría de masas para el análisis simultáneo del ácido araquidónico y sus metabolitos eicosanoides endógenos, prostaglandinas, ácidos dihidroxieicosatrienoicos, ácidos hidroxieicosatetraenoicos y ácidos epoxieicosatrienoicos en tejido cerebral de rata. J. Farmacéutica. Biomédica. Anal. 43, 1122-1134 (2007).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

Chen, J. y col. La administración intravenosa de sangre del cordón umbilical humano reduce los déficits de comportamiento después de un accidente cerebrovascular en ratas. Accidente cerebrovascular 32, 2682–2688 (2001).

Artículo CAS PubMed Google Scholar

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Esta investigación fue apoyada por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (Subvenciones Nos. 81303074, 81202781, 81403259 y 81303098), Proyectos del Plan de Ciencia y Tecnología de la Provincia de Hunan, China (No. 2013SK3280) y Fondos Especiales de Apoyo a los Medios de Vida de las Personas de Ciencia y Tecnología. de Changsha, China (Nº K1205018-31).

Laboratorio de Etnofarmacología, Instituto de Medicina Tradicional China y Occidental Integrada, Hospital Xiangya, Universidad Central Sur, Changsha, 410008, China

Zhihua Xing, Zian Xia, Chunhu Zhang, Tao Tang, Jiekun Luo, Rong Fan, Weiping Liu, Xingui Xiong, Wei Huang y Yang Wang

Departamento de medicina tradicional china, 2.º Hospital Xiangya, Universidad Central Sur, Changsha, 410011, China

Weijun Peng y Chenxia Sheng

Departamento de Medicina Interna de Tumores de Tiroides, Hospital Oncológico afiliado a la Facultad de Medicina de Xiangya, Universidad Central del Sur, Changsha, 410013, China

Jun Li

Departamento de Farmacia, Escuela de Especialidad a Nivel de la Facultad de Medicina de Shaoyang, Shaoyang, 422000, China

Fu Chunyan

Departamento de Gerontología y Enfermedades Respiratorias, Hospital Xiangya, Universidad Central Sur, Changsha, 410008, China

Yong Zou

Departamento de Oncología, Hospital Xiangya, Universidad Central Sur, Changsha, 410008, China

Haciendo ping Gan

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YW y ZHX diseñaron el estudio y ayudaron a coordinar el apoyo y la financiación. ZAX realizó la investigación y redactó el manuscrito. JL, CHZ, CYF y WJP participaron en los experimentos. TT, JKL, RF y WPL participaron en el diseño del estudio. XGX, YZ y PPG realizaron el análisis estadístico. WH, CXS y YW ayudaron a redactar el manuscrito. YW y ZAX revisaron el artículo. Todos los autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.

Los autores no declaran tener intereses financieros en competencia.

Este trabajo está bajo una licencia Creative Commons Attribution 4.0 International. Las imágenes u otro material de terceros en este artículo están incluidos en la licencia Creative Commons del artículo, a menos que se indique lo contrario en la línea de crédito; Si el material no está incluido bajo la licencia Creative Commons, los usuarios deberán obtener permiso del titular de la licencia para reproducir el material. Para ver una copia de esta licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Reimpresiones y permisos

Xing, Z., Xia, Z., Peng, W. et al. La decocción de Xuefu Zhuyu, una medicina tradicional china, proporciona neuroprotección en un modelo de lesión cerebral traumática en ratas a través de una vía antiinflamatoria. Representante científico 6, 20040 (2016). https://doi.org/10.1038/srep20040

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Recibido: 01 de octubre de 2015

Aceptado: 23 de diciembre de 2015

Publicado: 28 de enero de 2016

DOI: https://doi.org/10.1038/srep20040

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